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一、細(xì)胞轉(zhuǎn)染細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩大類。本實(shí)驗(yàn)室主要是質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、miRcroRNA轉(zhuǎn)染、慢病毒轉(zhuǎn)染、藥物轉(zhuǎn)染、多肽轉(zhuǎn)染等。二、miRcroRNA轉(zhuǎn)染(一)實(shí)驗(yàn)材料及試劑六孔板、CO2培養(yǎng)箱、EP管、酒精燈等;無血清培養(yǎng)基、MEM-α或DMEM、RNA、lipofectamine2000、MSC細(xì)胞等。(二)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1當(dāng)六孔板中MSC細(xì)胞密度達(dá)90%時(shí),準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染,將無血清培養(yǎng)基、MEM-α或DMEM取出...
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流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期1。實(shí)驗(yàn)原理用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期,通常用碘化丙啶(propidiumiodide,PI)染細(xì)胞核。PI在一定波長的光下發(fā)出熒光,其強(qiáng)度與DNA含量成正比。通過流式細(xì)胞儀分析各時(shí)期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù),可檢測細(xì)胞的增殖、凋亡。2。流式細(xì)胞儀檢測A549細(xì)胞周期步驟收集對數(shù)生長期細(xì)胞,計(jì)數(shù),以(1~5)×105/孔接種于6孔板,置37℃,5%CO2條件下培養(yǎng)過夜,使細(xì)胞貼壁。次日更換培養(yǎng)液,各孔分別加入含有0、80、400、2000、10000mg/L不同濃度茶...
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1、炎癥灶內(nèi)主要是巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤。單核吞噬細(xì)胞的浸潤對慢性炎癥十分重要。單核細(xì)胞從血管游出后轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞還可被激活。在炎癥灶局部巨噬細(xì)胞的積聚有三方面的原因:①由于從炎癥灶不斷產(chǎn)生吸引單核細(xì)胞的趨化因子,如C5a、纖維蛋白多肽、陽離子蛋白質(zhì)及膠原和纖維粘連蛋白的分解產(chǎn)物等。因此,從血液循環(huán)中滲出的單核細(xì)胞源源不斷來到局部,這是局部巨噬細(xì)胞的主要來源。②游出的巨噬細(xì)胞在局部通過有絲分裂而增殖,但巨噬細(xì)胞局部增殖的起始動(dòng)因還不清楚。③炎癥灶內(nèi)的巨噬細(xì)胞...
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激光掃描共聚焦顯微鏡可測定的樣品種類很多.包括生物材料、組織(切片)、細(xì)胞(亞細(xì)胞)結(jié)構(gòu)等。樣品中熒光的來源主要有如下幾種:自發(fā)熒光(autofluorescence)、熒光染色、免疫熒光、熒光蛋白、誘發(fā)熒光(inducedfluorescence)及酶致熒光(enzymaticallyproducedfluorescence)等等。其中大部分熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長均可在儀器自帶軟件的染料信息庫中找到。1.觀察步驟及儀器操作根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求制備樣品完畢后。即可進(jìn)行觀察?;静襟E如...
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人非小細(xì)胞肺癌裸鼠原位種植轉(zhuǎn)移模型的建立:(1)探討肺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和阻斷其遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的研究;(2)模擬晚期非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移的自然發(fā)生過程;(3)在活體動(dòng)物的完整器官內(nèi)評(píng)估瘤細(xì)胞播散和腫瘤的生長。實(shí)驗(yàn)方法原理將表達(dá)GFP的質(zhì)粒pRNAT-U6/Neo轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞A549,G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)GFP細(xì)胞,對比轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的生長活性和成瘤性。將轉(zhuǎn)染后細(xì)胞原位種植裸鼠預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)處死。HE染色和免疫組化檢測轉(zhuǎn)移灶的位置和數(shù)目。利用KODAKIS2000MM系統(tǒng)檢測腫瘤播散情況。實(shí)驗(yàn)材...
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人胃癌高轉(zhuǎn)移模型的建立可以:(1)研究腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制;(2)研究腫瘤防治;(3)為腫瘤轉(zhuǎn)移研究提供更為理想的動(dòng)物模型。腫瘤組織塊原位移植法實(shí)驗(yàn)方法原理用人胃癌組織塊SGC-7901原位移植于SCID小鼠,第4周末移植瘤向淋巴結(jié)和肝臟等器官轉(zhuǎn)移,轉(zhuǎn)移率達(dá)66.7%(2/3),第6周末轉(zhuǎn)移率高達(dá)*(10/10)。實(shí)驗(yàn)材料雄性SPF級(jí)SCID小鼠人胃癌組織SGC-7901試劑、試劑盒水合氯醛福爾馬林液儀器、耗材飼養(yǎng)籠光學(xué)顯微鏡石蠟實(shí)驗(yàn)步驟一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備1.雄性SPF級(jí)SCID小鼠,...
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人胰腺癌裸小鼠模型實(shí)驗(yàn)方法原理將人胰腺癌細(xì)胞株8988接種于裸鼠腋窩處皮下,每周測量腫瘤大小,第42d處死小鼠。腫瘤組織及相關(guān)臟器送病理及電鏡檢查,放射免疫法檢測相關(guān)抗原。皮下腫瘤組織細(xì)胞及細(xì)胞株培養(yǎng),HE染色。實(shí)驗(yàn)材料裸小鼠BALBcnu-nu胰腺癌細(xì)胞株8988試劑、試劑盒RPMI-1640*培養(yǎng)基胰酶戊二醛儀器、耗材CO2培養(yǎng)箱試管實(shí)驗(yàn)步驟一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備裸小鼠BALB/cnu-nu,4~6周齡,體重16~20g,雌雄兼?zhèn)洌琒PF級(jí)環(huán)境中飼養(yǎng),恒溫25~27℃,恒濕45...
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