動物組織切片實驗

簡要描述：動物組織切片實驗是達(dá)為科生物的基礎(chǔ)服務(wù)項目之一，由病理平臺經(jīng)驗豐富的實驗人員操作完成。

更新時間：2022-12-23
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2.1樣本包埋與固定
2.1.1取材和固定

切取組織時應(yīng)使用鋒利的刀、剪，切取組織塊時，從刀的根部開始向后拉動切開組織。組織塊的厚度約為0.2~0.3cm，大小為1.5cm×1.5cm x 0.3cm為宜。取好的組織塊置于10%福爾馬林中固定48小時；

2.1.2洗滌與脫水

將固定后的組織用流水沖洗，去除殘留的固定液和雜質(zhì)。不同濃度的乙醇逐級脫水，50%、70%、85%、95%直至純酒精（無水乙醇），每級2小時。脫水必須在有蓋的瓶中進(jìn)行，以防止高濃度乙醇吸收空氣中水分導(dǎo)致濃度降低而使脫水不*。需要保存的材料可脫水至70%乙醇時停留其中，如需長期保存，可加入等量的甘油。

2.1.3透明

將組織塊置入純乙醇和二甲苯的等體積混合液中2小時，再進(jìn)入純二甲苯兩小時，再一次純二甲苯兩小時；材料經(jīng)過透明，會顯示出前一步脫水的效果如何，若脫水*，組織則顯現(xiàn)透明狀態(tài)，如組織中有白色云霧狀，說明脫水不凈，須返工處理，但返工的效果往往不好。使用二甲苯透明時，應(yīng)避免其揮發(fā)和吸收空氣中的水分，并保持其無水狀態(tài)。

2.1.4浸蠟

浸蠟須在恒溫箱中進(jìn)行。先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬1～2小時，再先后移入2個熔化的石蠟液中浸漬各3小時左右；

2.1.5包埋

包埋是使浸透蠟的組織塊包裹在石蠟中。具體做法是；先準(zhǔn)備好紙盒，將熔蠟倒入盒內(nèi)，迅速用預(yù)溫的鑷子夾取組織塊平放在紙盒底部，切面朝下，再輕輕提起紙盒，平放在冷水中，待表面石蠟?zāi)毯罅⒓磳⒓埡邪慈胨校蛊溲杆倮鋮s凝固，30min后取出。

2.1.6切片

切片前將蠟塊在-20度冰箱中至少放置30min，以增加硬度。將切片刀裝在刀片機(jī)的刀架上并固定緊，固定蠟塊底座或蠟塊，調(diào)整蠟塊與刀至合適位置，刀刃與蠟塊表面呈5度角。調(diào)整切片機(jī)上的切片厚度為4-7μm，然后切片。

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