免疫熒光實驗是一種基于免疫學、生物化學和顯微鏡技術的強大方法，主要原理是利用熒光標記的抗體作為探針，定位和定性分析組織或細胞內特定抗原。實驗中，先用已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物，再用這種熒光抗體或抗原作為分子探針檢查細胞或組織內的相應抗原或抗體。熒光素受到激光的激發(fā)照射會發(fā)出明亮的熒光（紅色或綠色），據(jù)此可以觀察到熒光所在的細胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質、定位，并利用定量技術測定其含量。

　　免疫熒光實驗流程如下：

　　1、樣品準備：

　　對單層生長細胞，在傳代培養(yǎng)時，將細胞接種到預先放置有處理過的蓋玻片的培養(yǎng)皿中，待細胞接近長成單層后取出蓋玻片，PBS洗兩次；對懸浮生長細胞，取對數(shù)生長細胞，用PBS離心洗滌（1000rpm,5min）2次，用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂片。

　　2、固定：

　　根據(jù)需要選擇適當?shù)墓潭▌┕潭毎９潭ㄍ戤吅蟮募毎芍糜诤B氮納的PBS中4℃保存3個月。PBS洗滌3×5 min。

　　3、通透：

　　使用交聯(lián)劑（如多聚甲醛）固定后的細胞，一般需要在加入抗體孵育前，對細胞進行通透處理，以保證抗體能夠到達抗原部位。選擇通透劑應充分考慮抗原蛋白的性質。通透的時間一般在5-15min。通透后用PBS洗滌3×5 min。

　　4、封閉：

　　使用封閉液對細胞進行封閉，時間一般為30min。

　　5、一抗結合：

　　室溫孵育1h或者4℃過夜。PBST漂洗3次，每次沖洗5min。

　　6、二抗結合：

　　間接免疫熒光需要使用二抗。室溫避光孵育1h。PBST漂洗3次，每次沖洗5min后，再用蒸餾水漂洗一次。

　　7、封片及檢測：

　　滴加封片劑一滴，封片，熒光顯微鏡檢查。